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流式细胞仪是一种功能强大的工具,在微生物学、免疫学、病毒学、癌症生物学、干细胞生物学和代谢工程等不同领域有着广泛的应用。它通过测量细胞大小、细胞颗粒度以及细胞表面和细胞内分子的表达,以每秒数千个细胞的速度对悬浮液中的大量异质细胞群(如血细胞、干细胞和微生物)进行快速计数和表征。传统上典型流式细胞仪的仪器包括流体学、光学、电子学和数据分析。具体来说,使用多个激光器对毛细管或微流体通道中被动或主动聚焦的单个流动细胞流进行检测,然后由灵敏的光电检测器测量细胞发出的荧光信号,并在多参数直方图或散点图中对检测到的信号进行统计分析。然而荧光流式细胞仪面临着“颜色障碍”问题,这是因为荧光光谱本身较宽(约50nm)且无特征,因此使用一个激光装置时,可分辨的颜色数量仅限于25种(如果使用复杂的多个激光器和检测器,则为1045种)。

为了克服这些问题,BaySpec发明了一种基于拉曼光谱的不同类型的流式细胞仪。拉曼光谱的原理是分子振动对入射光子的非弹性散射。拉曼光谱通常比荧光窄50多倍。因此拉曼光谱可以绕过荧光的“颜色障碍”,在多方面应用大有可为。自发拉曼是分子热运动产生的非相干过程,导致信号获取速度缓慢,无法在短时间内对大量细胞进行检测。相干拉曼散射(CRS)是解决这一吞通量限制的有效方法。在相干拉曼散射法中,两个被“泵浦光”和斯托克斯光的强激光脉冲用于在分子振动中产生相干性。这些相干驱动分子发出的拉曼散射光相加,产生比自发拉曼测量强56个数量级的信号。利用CRS的高信号水平可将光谱采集时间从秒级缩短到毫秒级甚至微秒级实现高通量流式细胞术这是一项革命性的技术。

流式细胞仪